这么多蛋白裂解液，你选对了吗

这么多蛋白裂解液，你选对了吗

选择蛋白裂解液需根据实验目的、目标蛋白特性及实验条件来决定，以下从蛋白裂解液的成分、常用配方及注意事项等方面进行介绍：

阴/阳离子型去垢剂：如十二烷基硫酸钠（SDS）、N-月桂酰肌氨酸、CTAB等，作用强烈，能有效破坏分子内和分子间蛋白质相互作用，但易使蛋白质变性，受pH、离子强度和反离子性质等因素影响较大。胆汁酸盐也属于此类，如胆酸钠、脱氧胆酸等。

非离子型去垢剂：如麦芽糖苷、葡萄糖苷和聚乙二醇，亲水性头基不带电，性质温和，不分离蛋白质-蛋白质键，能使蛋白质保留天然结构和功能，可破坏蛋白质-脂质和脂质-脂质之间的相互作用。

两性去垢剂：如Zwittergents、Fos-Cholines、CHAPS/CHAPSO等，亲水头部带有正电荷和负电荷，呈电中性，但能像离子去垢剂一样破坏蛋白质之间的相互作用，中等温和。大多数成功的NMR膜蛋白研究都使用此类去垢剂，例如Fos-Choline 12。

pH缓冲液：维持pH相对稳定，防止蛋白质变性析出或水解。常用有Tris-Hcl体系、磷酸盐体系、HEPES-NaOH等，使用浓度一般为50mM左右。选择时要考虑蛋白等电点、缓冲液的缓冲范围等因素，Tris-Hcl体系使用最多。

盐离子和螯合剂：一般使用100mM - 200mM的NaCl或者KCl溶液模拟生理离子强度。提胞浆蛋白等易溶组分时，NaCl浓度不超过50mM；盐离子浓度过高可能导致蛋白盐析沉降，且使蛋白样品离子浓度过高，跑电泳时出现笑脸状条带，NaCl浓度一般不可高于500mM。螯合剂一般为低浓度（1mM终浓度）EDTA，可与金属离子络合，防止蛋白被金属蛋白酶降解，抑制核酸酶活性、调节渗透压和活化酶等。

还原剂：防止蛋白质在纯化和储存过程中半胱氨酸残基被氧化影响蛋白活性。常用有二巯基乙醇和DTT，二巯基乙醇使用浓度为5 - 20mM，DTT使用浓度一般为0.5 - 1.0mM。DTT稳定性较差，一般配成高浓度贮液并分装后于-20℃长期稳定储存。

强性RIPA裂解液

适用实验：WB，IP

配方：50mM Tris(pH 7.4)，150mM NaCl，1% Triton X-100，1% 去氧胆酸钠，0.1% SDS， 1 mM EDTA

中性RIPA裂解液

适用实验：WB，IP

配方：50mM Tris(pH 7.4)，150mM NaCl，1%NP-40，0.5% 去氧胆酸钠，1 mM EDTA

弱性RIPA裂解液

适用实验：WB，IP，CO-IP

配方：50mM Tris(pH 7.4)，150mM NaCl，1%NP-40，0.25% 去氧胆酸钠，1 mM EDTA

适用实验：专用于Pull-down和IP的蛋白样本制备

配方：25 mM Tris-HCl pH 7.4、150 mM NaCl、1 mM EDTA、1% NP-40 和 5% 甘油

适用实验：WB（制样时添加5% β-巯基乙醇）

配方：50 mM Tris-Cl pH 6.8，100 mmol/L DTT，2% SDS，0.1%溴酚蓝（如果需要BCA测蛋白浓度，不可以添加溴酚蓝），10%甘油

适用实验：用于提取胞质蛋白

配方：50 mM Tris，pH 8.0，150 mM NaCl，1% NP-40（可用 Triton X-100 替代 NP-40）

适用实验：提取细胞骨架蛋白

配方：10 mM Tris，pH 7.4，100 mM NaCl，1 mM EDTA，1 mM EGTA，1% Triton X-100，10% 甘油，0.1% SDS，0.5% 脱氧胆酸盐